1 産業枝術総合研究所コンパクト化学プロセス研究センターResearch Center for Compact Chemical Process, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (AIST) ◇ 〒305-8565 茨城県つくば市東1-1-1 中央第5
2 東京理科大学理工学部応用生物科学科Department of Applied Biological Science, Faculty of Science and Technology, Science University of Tokyo
遺伝子の解読が進んだ現在，その遺伝子の持つ情報に従って合成されるタンパク質の機能解明が重要になっている。評価・解析のために限らず，タンパク質を合成しようとする場合，生物のカを借りることになる。分子生物学の進歩により大腸菌を用いたタンパク質合成法は，周辺技術の進歩も大きく比較的簡便でスケールアップも容易であり，経済性が認められる。しかしながら，この手法により合成したタンパク質は正しい高次構造を取れないことが多く，アミノ酸鎖を巻き戻す（リフォールディング）ことが必要になる場合が多い。リフォールディング手法は，近年盛んに研究されているものであるが，透析や希釈などの従来法によるものが多く，長い処理時間を必要とし，なおかつ汎用的であるものはほとんどない。そこでゼオライトの吸着性能を利用して，タンパク質を巻き戻す手法を新たに開発した。本手法には，処理時間が短く，なおかつ処理方法がタンパク質の違いに依存しない利点がある。アミノ酸鎖を一旦引き延ばしてゼオライトに吸着させ，その後剥離剤を用いることでリフォールディングを起こさせるものである。剥離剤に用いるバッファー組成の調整のみで，多様なタンパク質に対応できる可能性がある。大腸菌によるタンパク質合成を経済的に成立させるためには，汎用的なリフォールディング手法の確立がなくてはならず，今後の発展が期待される分野である。ゼオライトの新しい利用法として，新規なリフォールディング法を紹介する。
We presented a simple and effective refolding method using a zeolite. This method involves in a three-step procedure. First step is denature and solubilization of inclusion body proteins. Second step is the adsorption of solubilized protein onto the zeolite. Final step is the desorption of the protein from the zeolite and the protein is refolded successfully under well-controlled conditions. The refolded proteins are biochemically active, and NMR spectrum supports that refolding is correctly performed. This method can be simple and widely applied to any denatured proteins. In the postgenomics era, this refolding technique contributes to the good combination with recombinant system of Escherichia coli that produces economically many proteins.
Key words: refolding; zeolite; protein; inclusion body; recombinant; Escherichia coli
© 2006 ゼオライト学会© 2006 Japan Association of Zeolite
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